摘要：本实验利用柱层析法提取和分离了胡萝卜素，并进行了一些实验改进，取得了良好   的实验效果。

关键字：无水Na₂SO₄   研磨  预处理

一、贵重仪器

旋转蒸发器                                      一台

ＵV-240型紫外-可见分光光度计       一台

电热干燥箱                                      一台

二、常规仪器

层析柱（20x700mm）                        一根

铁架台                                          一套

锥形瓶       　500ml                         二个

                　50ml                          五个

烧杯          　500ml                         二个

滴液漏斗 　　500ml                         一个

量筒　       500ml、50ml              各一个

玻璃棒         100cm                      一个

                   20cm                         二个

研钵                                              一套

滴管                                              二个

三、试剂

80-100目    柱层析硅胶       青岛海洋化工厂分厂

60-90℃       石油醚               北京化工厂                    AR

乙醇                                  北京化工厂                    AR

乙酸乙脂                             北京化工三厂                      AR

无水Na₂SO₄                       天津市塘沽邓中化工厂      CP

1% AgNO₃水溶液（自制）

pH试纸

胡萝卜（自备）

四、实验步骤

1、提取

2、柱层析

3、结构表征-胡萝卜素的UV分析

 具体实验步骤见讲义2-3页有关内容。

五、实验记录及讨论

1、本实验在提取操作中进行了实验性尝试，在研磨过程中加入了3g的无水Na₂SO₄以增强研磨强度，有利于有效成分的提取。在选用提取液时未使用乙醇，而使用了15ml乙醚，10ml丙酮X2次，10ml石油醚X5次，采用在研钵中加提取剂，研磨，然后倾其上层液体抽滤。这样避免了将混合物全部倒入漏斗，造成抽滤难以进行的后果。

2、本实验中耗时最多的一步操作是硅胶的处理过程：

    第一、硅胶的预处理，我们以浓盐酸浸泡硅胶14小时，然后用蒸馏水洗涤硅胶4次后，将起进行减压抽滤，后不断加蒸馏水冲洗。在1小时之后，抽滤的水呈中性，但仍然含有氯离子。经过4小时不断的冲洗才使得抽滤液中基本不含氯离子。晾干一周后，在110℃烘箱中活化2小时。

    第二、活化后的硅胶加石油醚浸泡并搅拌均匀。在装柱时，宜使用口径较大的玻璃漏斗置于 层析柱上部，注入1/2高的石油醚，打开下部活塞，然后尽量均匀地将硅胶倾入漏斗，这样可以防止层析柱中形成断层(这一步是实验的关键步骤)。

3、柱层析过程中得到了二个显色带，第一个带显橙黄色，第二个带显淡黄色。从加入洗脱剂到收集完第一个显色带耗时90分钟，使用洗脱剂（石油醚/乙酸乙脂=2/1V/V）120ml，收集到约50ml。然后加入95%的乙醇进行洗脱，耗时30分钟收集到了第二个显色带，约有30ml。由实验可知以极性大的洗脱剂洗脱速度较快，而且收集的显色带较集中。如果在层析柱中有气泡或断层将影响分离效果，造成显色带较宽。

六、谱图分析

1、实验所得第一个显色带为α—胡萝卜素

        参考数据为：α—胡萝卜素    473（134896），444（147911），422（104713）

        实验数据为：       473.20（119490），445.47（137330），425.84（110090）

2、实验所得第二个显色带呈淡黄色，做旋光分析发现起具有较小的旋光度，可能是β-胡萝卜素。